第1章 概述  1.1 基因工程的基本概念  1.2 基因工程的發(fā)展歷史  1.3 基因工程的研究意義第2章 基因表達(dá)調(diào)控的原理與技術(shù)  2.1 啟動(dòng)子調(diào)控模型    2.1.1 啟動(dòng)子的組成及其功能    2.1.2 啟動(dòng)子的順式增強(qiáng)作用    2.1.3 啟動(dòng)子的反式協(xié)同作用    2.1.4 啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)的多樣性  2.2 操縱子調(diào)控模型    2.2.1 操縱子基因表達(dá)調(diào)控的基本原理    2.2.2 乳糖操縱子    2.2.3 半乳糖操縱子    2.2.4 阿拉伯糖操縱子    2.2.5 色氨酸操縱子    2.2.6 入噬菌體的操縱子  2.3 感受應(yīng)答調(diào)控模型    2.3.1 感受應(yīng)答調(diào)控模型的基本原理    2.3.2 真核生物轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件的相互作用    2.3.3 真核生物轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的激活方式  2.4  rna結(jié)構(gòu)調(diào)控模型    2.4.1 終止子的工作原理    2.4.2 衰減子的工作原理    2.4.3 反義子的工作原理  2.5  rna剪切編輯調(diào)控模型  2.6 基因工程的支撐技術(shù)    2.6.1 核酸凝膠電泳技術(shù)    2.6.2 核酸分子雜交技術(shù)    2.6.3 細(xì)菌轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)染技術(shù)    2.6.4 聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)    2.6.5  dna序列分析技術(shù)    2.6.6 寡核苷酸合成技術(shù)    2.6.7 基因定點(diǎn)突變技術(shù)第3章 基因工程的單元操作  3.1 工具酶    3.1.1 限制性核酸內(nèi)切酶    3.1.2  t4 dna連接酶    3.1.3  dna聚合酶    3.1.4 核酸酶    3.1.5 核酸修飾酶  3.2 載體    3.2.1 質(zhì)粒載體    3.2.2 λ雙鏈?zhǔn)删wdna載體    3.2.3 m13單鏈?zhǔn)删wdna載體    3.2.4 噬菌體／質(zhì)粒雜合載體    3.2.5 人造染色體載體  3.3 受體細(xì)胞  3.4  dna的體外重組(切與接)    3.4.1 dna切接反應(yīng)的影響因素    3.4.2 dna分子重組的方法  3.5 重組dna分子的轉(zhuǎn)化與擴(kuò)增(轉(zhuǎn)與增)    3.5.1 轉(zhuǎn)化率及其影響因素    3.5.2 轉(zhuǎn)化細(xì)胞的擴(kuò)增  3.6 轉(zhuǎn)化子的篩選與重組子的鑒定(檢)    3.6.1 基于載體遺傳標(biāo)記的篩選與鑒定    3.6.2 基于克隆片段序列的篩選與鑒定    3.6.3 基于外源基因表達(dá)產(chǎn)物的篩選與鑒定  3.7 目的基因的克隆    3.7.1 鳥槍法    3.7.2 cdna法    3.7.3 pcr擴(kuò)增法    3.7.4 化學(xué)合成法    3.7.5 基因文庫(kù)的構(gòu)建第4章 大腸桿菌的基因工程  4.1 外源基因在大腸桿菌中的高效表達(dá)原理    4.1.1 啟動(dòng)子    4.1.2 終止子    4.1.3  sd序列    4.1.4 密碼子    4.1.5 質(zhì)粒拷貝數(shù)  4.2 大腸桿菌工程菌的構(gòu)建策略    4.2.1 包涵體型異源蛋白的表達(dá)    4.2.2 分泌型異源蛋白的表達(dá)    4.2.3 融合型異源蛋白的表達(dá)    4.2.4 寡聚型異源蛋白的表達(dá)    4.2.5 整合型異源蛋白的表達(dá)    4.2.6 蛋白酶抗性或缺陷型表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建  4.3 重組異源蛋白的體外復(fù)性活化    4.3.1 包涵體的溶解與變性    4.3.2 異源蛋白的復(fù)性與重折疊  4.4 大腸桿菌工程菌培養(yǎng)的*優(yōu)化控制    4.4.1 細(xì)菌生長(zhǎng)的動(dòng)力學(xué)原理    4.4.2 發(fā)酵過(guò)程的*優(yōu)化控制    4.4.3 大腸桿菌工程菌的高密度發(fā)酵  4.5 基因工程菌的遺傳不穩(wěn)定性及其對(duì)策    4.5.1 工程菌遺傳不穩(wěn)定性的表現(xiàn)與機(jī)制    4.5.2 改善工程菌不穩(wěn)定性的對(duì)策  4.6 利用重組大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素    4.6.1 胰島素的結(jié)構(gòu)及其生物合成    4.6.2 人胰島素的生產(chǎn)方法    4.6.3 產(chǎn)人胰島素大腸桿菌工程菌的構(gòu)建策略第5章 酵母的基因工程  5.1 酵母的受體系統(tǒng)    5.1.1 提高重組異源蛋白產(chǎn)率的突變型受體    5.1.2 抑制超糖基化作用的突變型受體    5.1.3 減少泛素依賴型蛋白降解作用的突變型受體    5.1.4 內(nèi)源性蛋白酶缺陷型的突變型受體  5.2 酵母的載體系統(tǒng)    5.2.1 釀酒酵母中的2¨環(huán)狀質(zhì)粒    5.2.2 乳酸克魯維酵母中的線狀質(zhì)粒    5.2.3 果蠅克魯維酵母中的環(huán)狀質(zhì)粒    5.2.4 含有ars的yrp和yep質(zhì)粒及其構(gòu)建    5.2.5 含有cen的ycp載體及其構(gòu)建    5.2.6 含有丁el的yac載體及其構(gòu)建  5.3 酵母的轉(zhuǎn)化系統(tǒng)    5.3.1 酵母的轉(zhuǎn)化程序    5.3.2 轉(zhuǎn)化質(zhì)粒在宿主細(xì)胞中的命運(yùn)    5.3.3 用于轉(zhuǎn)化子篩選的標(biāo)記基因  5.4 酵母的表達(dá)系統(tǒng)    5.4.1 酵母啟動(dòng)子的基本特征與選擇    5.4.2 酵母啟動(dòng)子的可調(diào)控表達(dá)系統(tǒng)    5.4.3 外源基因在酵母中表達(dá)的限制性因素    5.4.4 酵母表達(dá)系統(tǒng)的選擇  5.5 酵母的蛋白修飾分泌系統(tǒng)    5.5.1 酵母的蛋白質(zhì)分泌運(yùn)輸機(jī)制    5.5.2 酵母的信號(hào)肽及其剪切系統(tǒng)    5.5.3 酵母分泌型蛋白的糖基化修飾  5.6 利用重組酵母生產(chǎn)乙肝疫苗    5.6.1 乙肝病毒的結(jié)構(gòu)    5.6.2 產(chǎn)乙肝表面抗原的重組釀酒酵母構(gòu)建    5.6.3 產(chǎn)乙肝表面抗原的重組巴斯德畢赤酵母構(gòu)建  5.7 利用重組酵母生產(chǎn)人血清清蛋白