**章　感受態細胞的快速制備及轉化 001**節　感受態細胞的化學法快速制備 003一、實驗目的 003二、實驗原理 003三、實驗材料、試劑與設備 004四、實驗流程 004五、注意事項 005六、思考題 005第二節　利用熱激法制備的感受態細胞進行轉化 006一、實驗目的 006二、實驗原理 006三、實驗材料、試劑與設備 007四、實驗流程 007五、注意事項 007**章　感受態細胞的快速制備及轉化 001**節　感受態細胞的化學法快速制備 003一、實驗目的 003二、實驗原理 003三、實驗材料、試劑與設備 004四、實驗流程 004五、注意事項 005六、思考題 005第二節　利用熱激法制備的感受態細胞進行轉化 006一、實驗目的 006二、實驗原理 006三、實驗材料、試劑與設備 007四、實驗流程 007五、注意事項 007六、思考題 008第三節　感受態細胞的電轉化法快速制備 009一、實驗目的 009二、實驗原理 009三、實驗材料、試劑與設備 009四、實驗流程 010五、注意事項 010六、思考題 011第四節　利用電轉化法制備的感受態細胞進行轉化 012一、實驗目的 012二、實驗原理 012三、實驗材料、試劑與設備 013四、實驗流程 013五、注意事項 013六、思考題 014 第二章　PCR 擴增及瓊脂糖凝膠核酸電泳技術 015**節　常規PCR 技術 017一、實驗目的 017二、實驗原理 017三、實驗材料、試劑與設備 017四、實驗流程 019五、注意事項 019六、思考題 020第二節　重疊延伸PCR 技術 021一、實驗目的 021二、實驗原理 021三、實驗材料、試劑與設備 021四、實驗流程 023五、注意事項 023六、思考題 024第三節　定點突變PCR 技術 025一、實驗目的 025二、實驗原理 025三、實驗材料、試劑與設備 025四、實驗流程 026五、注意事項 027六、思考題 028第四節　瓊脂糖凝膠核酸電泳技術 029一、實驗目的 029二、實驗原理 029三、實驗材料、試劑與設備 029四、實驗流程 030五、注意事項 031六、思考題 032 第三章　DNA 提取 033**節　大腸桿菌基因組的提取（機械破胞 柱法回收） 035一、實驗目的 035二、實驗原理 035三、實驗材料、試劑與設備 036四、實驗流程 036五、注意事項 037六、思考題 037第二節　質粒提?。▔A裂解 柱回收法） 038一、實驗目的 038二、實驗原理 038三、實驗材料、試劑與設備 039四、實驗流程 039五、注意事項 040六、思考題 041第三節　PCR 產物回收（乙醇沉淀法） 042一、實驗目的 042二、實驗原理 042三、實驗材料、試劑與設備 042四、實驗流程 043五、注意事項 043六、思考題 043第四節　PCR 產物/ 酶切產物純化（柱提法） 044一、實驗目的 044二、實驗原理 044三、實驗材料、試劑與設備 044四、實驗流程 045五、注意事項 046六、思考題 046 第四章　工具酶的使用以及載體構建 047**節　限制性核酸酶（DpnⅠ）的使用 050一、實驗目的 050二、實驗原理 050三、實驗材料、試劑與設備 050四、實驗流程 051五、注意事項 051六、思考題 052第二節　限制性核酸內切酶的使用 053一、實驗目的 053二、實驗原理 053三、實驗材料、試劑與設備 053四、實驗流程 054五、注意事項 055六、思考題 055第三節　連接酶的使用 056一、實驗目的 056二、實驗原理 056三、實驗材料、試劑與設備 056四、實驗流程 057五、注意事項 057六、思考題 059第四節　T 載體構建 060一、實驗目的 060二、實驗原理 060三、實驗材料、試劑與設備 061四、實驗流程 061五、注意事項 062六、思考題 062 第五章　陽性轉化子的篩選與鑒定 063**節　菌落PCR 鑒定 065一、實驗目的 065二、實驗原理 065三、實驗材料、試劑與設備 065四、實驗流程 066五、注意事項 067六、思考題 067第二節　基于藍白斑篩選的載體構建 068一、實驗目的 068二、實驗原理 068三、實驗材料、試劑與設備 068四、實驗流程 069五、注意事項 070六、思考題 070第三節　基于熒光蛋白報告基因的載體構建和鑒定 071一、實驗目的 071二、實驗原理 071三、實驗材料、試劑與設備 071四、實驗流程 072五、注意事項 072六、思考題 073第四節　選取載體的重鑒定 074一、實驗目的 074二、實驗原理 074三、實驗材料、試劑與設備 074四、實驗流程 075五、注意事項 076六、思考題 076 第六章　蛋白質表達純化及鑒定 077**節　蛋白質表達 079一、實驗目的 079二、實驗原理 079三、實驗材料、試劑與設備 079四、實驗流程 080五、注意事項 080六、思考題 081第二節　細胞收集與破碎 082一、實驗目的 082二、實驗原理 082三、實驗材料、試劑與設備 082四、實驗流程 083五、注意事項 084六、思考題 084第三節　蛋白質純化 085一、實驗目的 085二、實驗原理 085三、實驗材料、試劑與設備 085四、實驗流程 086五、注意事項 087六、思考題 088第四節　SDS-PAGE 電泳 089一、實驗目的 089二、實驗原理 089三、實驗材料、試劑與設備 089四、實驗流程 091五、注意事項 092六、思考題 093 第七章　CRISPR 技術應用 095**節　CRISPR 基因敲除 097一、實驗目的 097二、實驗原理 097三、實驗材料、試劑與設備 097四、實驗流程 100五、注意事項 102六、思考題 103第二節　CRISPR 基因敲除驗證及質粒去除 104一、實驗目的 104二、實驗原理 104三、實驗材料、試劑與設備 104四、實驗流程 105五、注意事項 106六、思考題 107第三節　CRISPR 基因抑制 108一、實驗目的 108二、實驗原理 108三、實驗材料、試劑與設備 108四、實驗流程 109五、注意事項 110六、思考題 110第四節　CRISPR 基因激活 111一、實驗目的 111二、實驗原理 111三、實驗材料、試劑與設備 112四、實驗流程 112五、注意事項 113六、思考題 114 附錄一　常用培養基配方 115 附錄二　常用限制性內切酶 119 附錄三　思考題參考答案 123 參考文獻 139