序 i
第二版前言 v
**版前言 vii
1?概述 1
1.1?流式細胞術基本概念 2
1.2?分析型流式細胞儀介紹 5
1.3?分選型流式細胞儀介紹 9
參考文獻 13
2?流式細胞儀的原理 14
2.1?液流系統 15
2.2?光路系統 18
2.3?檢測分析系統 28
2.4?分選系統 32
參考文獻 37
3?流式圖 39
3.1?流式通道 40
3.2?流式直方圖 41
3.3?流式散點圖 45
3.4?流式等高線圖 48
參考文獻 50
4?流式細胞術的基本操作與技巧 51
4.1?樣品制備 52
4.1.1?獨立細胞樣品制備 52
4.1.2?免疫器官樣品制備 54
4.1.3?實體臟器樣品制備 55
4.2?熒光素偶聯抗體及其標記方法 56
4.2.1?熒光素 57
4.2.2?熒光素偶聯抗體 61
4.2.3?樣品封閉 62
4.2.4?熒光素偶聯抗體標記 64
4.3?光電倍增管電壓設定 66
4.4?對照的設置 71
4.4.1?陰性對照的設置 71
4.4.2?fmo對照 73
4.4.3?陽性對照的設置 74
4.5?補償調節 75
4.5.1?補償調節的原理 75
4.5.2?調節補償的具體方法 76
4.5.3?三色和四色分析補償調節方法 79
4.5.4?影響補償大小的因素 82
4.6?閾值設定 84
4.7?流式分析中的死細胞問題 85
4.7.1?減少樣品中死細胞比例的方法 86
4.7.2?流式分析時區分死細胞和活細胞的方法 86
4.8?流式分選模式選擇 91
4.8.1?純化模式 92
4.8.2?富集模式 93
4.8.3?單細胞模式 93
4.9?上樣速度控制 94
4.9.1?流式分析速度控制 95
4.9.2?流式分選速度控制 95
4.10?分選設門基本原則 97
4.11?流式分選基本步驟 99
參考文獻 100
5?流式分析術的應用 102
5.1?細胞群比例測定 103
5.2?表型測定 109
5.3?檢測細胞因子 115
5.3.1?胞內染色法檢測細胞因子 116
5.3.2?胞內染色法與elisa法比較 123
5.3.3?cba法測定細胞因子 125
5.3.4?cba法與elisa法比較 127
5.4?檢測細胞增殖 128
5.4.1?相對計數法 129
5.4.2?示蹤染料標記法 133
5.4.3?brdu和edu摻入法 138
5.4.4?其他方法 141
5.5?檢測細胞凋亡 142
5.5.1?annexin v/pi雙染色法 142
5.5.2?syto/pi雙染色法 145
5.5.3?細胞dna含量分析法檢測細胞凋亡 146
5.5.4?線粒體損傷檢測法 147
5.5.5?活化的caspase-3檢測法 151
5.5.6?熒光素偶聯的caspase抑制劑(flica)標記法 151
5.5.7?甲酰胺誘導ssdna單抗檢測法 152
5.5.8?tunel法 153
5.6?檢測細胞周期 154
5.6.1?非特異性核酸熒光染料標記法 154
5.6.2?特異性細胞周期調節蛋白檢測法 159
5.7?檢測細胞殺傷能力 160
5.8?檢測細胞吞噬功能 166
5.9?檢測胞內活化的激酶 168
5.10?檢測細胞自噬 169
5.11?檢測基因表達 171
5.11.1?gfp報告基因系統 171
5.11.2?lacz報告基因系統 172
5.11.3?β-內酰胺酶報告基因系統 173
5.11.4?新型膜結合型報告分子系統 174
5.12?檢測細胞內兩種蛋白質的直接結合 174
5.12.1?熒光共振能量轉移結合流式細胞術檢測兩種蛋白質的直接結合 174
5.12.2?雙分子熒光互補結合流式細胞術檢測兩種蛋白質的直接結合 176
5.13?微生物學中的應用 177
5.13.1?熒光素偶聯抗體直接檢測法 178
5.13.2?抗體結合人工熒光微球直接檢測法 179
5.13.3?微生物活性流式檢測 179
5.13.4?人工微球熒光免疫試驗檢測抗體 180
5.13.5?熒光原位雜交流式檢測法 181
5.13.6?pcr免疫微珠法 182
5.13.7?原位pcr雜交流式檢測法 182
5.14?檢測鈣相關分子 183
5.14.1?檢測細胞內游離的鈣離子水平 183
5.14.2?檢測鈣蛋白酶活性 184
5.14.3?檢測細胞膜鈣泵活性 186
5.15?表觀遺傳學中的應用 188
5.15.1?chip-on-beads法 189
5.15.2?檢測細胞水平組蛋白修飾情況 191
5.16?檢測縫隙連接介導的細胞通訊 191
5.17?檢測細胞內ph值和鈉氫轉運體活性 194
5.17.1?檢測細胞內ph值 194
5.15.2?檢測鈉氫轉運體活性 196
5.18?其他應用 197
5.18.1?檢測活性氧簇 197
5.18.2?檢測細胞內游離的鋅離子水平 198
5.18.3?檢測端粒長度 199
5.18.4?檢測脂筏結合蛋白 201
引文目錄 203
參考文獻 207
6?流式分選術的應用 211
6.1?流式分選與磁性分選 212
6.2?流式分選獨立群體細胞 214
6.3?流式分選非獨立細胞群體 216
6.4?流式分選低比例細胞群體 220
6.4.1?強勢細胞群的輻射影響 220
6.4.2?流式分選結合磁性分選 221
6.4.3?二次分選法 222
6.5?流式分選干細胞 224
6.5.1?流式分選造血干細胞 224
6.5.2?流式分選側群干細胞 229
6.5.3?流式分選間充質干細胞 231
6.5.4?流式分選腫瘤干細胞 232
參考文獻 235